蘋果的組織培養(yǎng)是采用無菌培養(yǎng)技術(shù)-上海農(nóng)卉生物科技有限公司

蘋果的組織培養(yǎng)是采用無菌培養(yǎng)技術(shù)

　　蘋果的組織培養(yǎng)是采用無菌培養(yǎng)技術(shù)，將來自優(yōu)良植物的莖尖、腋芽、葉片、鱗片、塊根和球莖等器官以及它們的組織切片進行離體培養(yǎng)，使之在短期內(nèi)獲得大量遺傳性一致的個體的方法。由于離體技術(shù)處理嚴格，所以很容易脫除一些細菌病原及病毒，是復(fù)壯品種的有效措施。已成功脫除的病毒和病害有蘋果褪綠葉斑病毒、花葉病病毒、輪紋病等。蘋果矮化砧、抗寒砧的組織培養(yǎng)也已成功。蘋果脫毒組培技術(shù)流程具體如下。

　　一、外植體材料選擇與處理

　　早春，將上年芽接或切接的盆栽長富2號蘋果苗移人溫室，待新梢長出3～5片新葉時，放入熱處理箱中，37℃恒溫熱處理30 d或32℃與37℃每8 h變換一次，變溫熱處理60 d。脫毒率可達80％以上。熱處理結(jié)束后，從盆栽苗嫩梢上采集生長旺盛、長約2～3cm頂梢，流水沖洗10min，去掉小葉。70％乙醇浸泡30s，蒸餾水沖洗后放入0.1％ HgCI中消毒10min，無菌水沖洗3～5次，解剖鏡下迅速剝?nèi)?.0 mm的莖尖進行分離培養(yǎng)，接種于起始培養(yǎng)基上。

　　二、培養(yǎng)基制備

　　1.1 芽誘導(dǎo)

　　適宜蘋果芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。誘導(dǎo)的芽生長正常可發(fā)育成新梢。

　　1.2 繼代培養(yǎng)

　　選擇誘導(dǎo)的芽叢切割成單芽莖段，轉(zhuǎn)接于設(shè)計的繼代培養(yǎng)基上。適宜的蘋果繼代培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖4％+瓊脂0.36mg/L。培養(yǎng)條件：光照強度2000～2500lx，光照時間14～16 h/d，適宜溫度為25℃±2.0℃。40 d后增殖6.1倍。

　　1.3 生根培養(yǎng)

　　選擇生長正常的繼代培養(yǎng)苗，剪成單芽莖段，插入生根培養(yǎng)基中，蘋果適宜的生根培養(yǎng)基為：1／2MS+IAA1.5mg/L+蔗糖25％+瓊脂0.36％。培養(yǎng)30d后，平均4～6條根／苗，長達0.5～1.0cm。根白且粗，多直接生于莖基部。

　　三、培養(yǎng)條件

　　溫度26～30℃，光照強度1500～2000 LX，10 h/d。

　　四、煉苗、移栽

　　強光閉瓶鍛煉生根苗20～25 d，不定根長至1 cm時，將培養(yǎng)瓶移至自然強光下，不去封口膜繼續(xù)培養(yǎng)20 d左右，使試管苗幼莖更加充實健壯。光太強時可遮陰，控制溫度在35℃以下。閉瓶鍛煉后開瓶鍛煉，除去封口膜，繼續(xù)鍛煉2～5d，使試管苗適應(yīng)低濕環(huán)境。然后從瓶內(nèi)取出經(jīng)過鍛煉生根的試管苗，洗去根部的培養(yǎng)基，移栽于營養(yǎng)缽中(基質(zhì)為田園土：腐熟發(fā)黑鋸末；河沙=1:2:1混合配制)，于溫度25℃的塑料大棚中培育。將營養(yǎng)缽小苗放在塑料大棚內(nèi)加蓋有薄膜的小拱棚內(nèi)，早晚各灑水1次，1～3d保持相對濕度在85％以上，基質(zhì)水分不宜過多。1周后開始逐漸揭膜通風，直至完全除去薄膜。過渡移栽約30d，地上部分生長到10cm左右時可移至大田。